Этапы работы

Основные этапы работы занимают 2 дня: 1-й день: приготовление взвеси эритроцитов; подбор антигенов и сывороток; обработка сывороток; расстановка и маркировка панелей; подготовка протокола опыта; определение гемагглютикирующего титра антигена. 2-й день: подготовка необходимых разведений исследуемых сывороток; приготовление антигенов, содержащих рабочую дозу; постановка и учет самой реакции. Постановка РТГА. Для постановки реакции используют полистироловые панели с лунками. Каждую пару сывороток от одного больного исследуют с несколькими антигенами, полученными из актуальных штаммов вируса гриппа А и В. Выполнение реакции начинают с приготовления стандартной рабочей дозы гриппозного антигена.

Для приготовления рабочей дозы предварительно определяют титр антигена в реакции гемагглютинации. С этой целью готовят двукратные разведения взятых в опыт антигенов вируса гриппа А и В на изотоническом растворе хлорида натрия, начиная с 1:2, в объеме 0,1 мл. На каждый антиген берут отдельную пипетку. Затем в каждую лунку панели другой пипеткой добавляют по 0,1 мл изотонического раствора хлорида натрия и 0,2 мл 1 % суспензии эритроцитов. Одновременно ставят контроль эритроцитов (0,2 мл суспензии эритроцитов и 0,2 мл изотонического раствора хлорида натрия). Панели встряхивают и оставляют при комнатной температуре. Учет результатов реакции проводят после оседания эритроцитов в контроле. Наибольшее разведение вирусосодержащей жидкости, в котором отмечается полная гемагглютинация, содержит одну агглютинирующую единицу (1АЕ) и является титром антигена в 0,1 мл.