Иммунофлюоресцентная окраска препаратов

Цель иммуно-флюоресцентной окраски препаратов — получение специфических комплексов антиген — антитело внутри или на поверхности клеток или доказательство отсутствия образования таких комплексов. Для решения этой задачи необходимо обеспечить проникновение раствора флюоресцирующих антител внутрь исследуемых клеток препарата, взаимодействие этих антител с антигенами, удаление непрореагировавших антител из клеток. Поскольку молекулы иммуноглобулинов сравнительно велики (относительная молекулярная масса около 170 000) и диффундируют сквозь мембраны гораздо медленнее, чем соли, время реакции оказывается довольно значительным. Полноценную диагностическую ИФ-реакцию обеспечивает следующий режим обработки препаратов.

Стекла с фиксированными мазками помещают во влажную камеру, на каждый мазок наносят каплю раствора соответствугощих флюоресцирующих антител в рабочем разведении, камеру помешают в термостат (при 37 °С). Через 30 мин препараты вынимают из влажной камеры, стряхивают с них капли растворов антител, споласкивают препараты в стакане с забуференным изотоническим раствором хлорида натрия и помещают в специальный сосуд с таким же раствором на 30 мин (при комнатной температуре) для тщательной отмывки. Затем препараты вынимают, споласкивают в дистиллированной воде, погружая в нее на несколько секунд, высушивают в вертикальном положении над потоком воздуха при комнатной температуре.