Контроль реакции

Для стандартизации количества антигена в рабочей суспензии дозу вируса необходимо проверить не только путем титрования, как указано выше, но и по результатам взаимодействия вируса со стандартной иммунной референс-сывороткой. Для этого после получения вируса, гемагглютинирующая активность которого  соответствует 4 АЕ,  готовят 2-кратное разведение иммунной сыворотки к данному вирусу, начиная с 1 : 10. К 0,1 мл полученного разведения сыворотки добавляют по 0,1 мл 4 АЕ вируса и по 0,2 мл 1 % суспензии эритроцитов. Результаты реакции учитывают после оседания эритроцитов. За титр сыворотки принимают наибольшее ее разведение, которое обеспечивает полное торможение гемагглютинации 4 АЕ вируса.

Во всех последующих опытах стандартная сыворотка должна нейтрализовать 4 АЕ вируса в разведении, установленном в первом опыте. Перед постановкой самой реакции парные сыворотки разводят 1 : 10 изотоническим раствором хлорида натрия, прогревают 30 мин при 56—58 °С и исследуют в одном опыте. Для этого на изотоническом растворе готовят серию двукратных разведений сывороток (с 1:10 до 1 : 640) в объеме 0,1 мл. Сыворотки разводят отдельными пипетками. Готовят столько рядов разведений, сколько взято в опыт антигенов вируса гриппа. К каждому разведению добавляют по 0,1 мл рабочей дозы антигена (4 АЕ) вируса А или В. На каждый антиген берут отдельную пипетку. Панели встряхивают.

После контакта сывороток с вирусным антигеном в течение часа при комнатной температуре к смеси добавляют по 0,2 мл 1 % суспензии эритроцитов. Панели встряхивают и оставляют при комнатной температуре на 40—45 мин (до оседания эритроцитов в контроле). Реакция сопровождается контролем: 1) правильности выбора рабочей дозы вирусного антигена (4 АЕ); 2) дозы и специфичности антигена по референс-сыворотке; 3) качества эритроцитов (0,2 мл 1 % суспензии эритроцитов и 0,2 мл изотонического раствора хлорида натрия). Учет реакции проводят после оседания эритроцитов в контроле. За титр сыворотки принимают наивысшее ее разведение, в котором отмечается полное торможение реакции гемагглютинации.