Контроль специфичности реакции

Титром комплемента считают то его наибольшее разведение, в котором наблюдается полный гемолиз эритроцитов при соответствующем максимальном разведении гемолитической сыворотки. В реакции по идентификации вирусов используют 2 дозы комплемента (например, при титре его 1 : 40 двум дозам соответствует разведение 1:20).

Дозу исследуемого вируса (антигена) определяют титрованием в реакции гемагглютинации. В опыт берут обычно до 16 гемагглютинирующих доз антигена. Эталонные иммунные сыворотки морских свинок разводят в соотношении 1 : 10 и прогревают при 60 °С в течение 20 мин. Для проведения исследования их разводят в 2 раза от 1 : 10 и т. д. В ряд пробирок вносят по 0,1 мл сыворотки соответствующего разведения, добавляют по 0,1 мл комплемента в разведении, соответствующем двум его дозам. Контроль: 1) контроль сыворотки — к 0,1 мл сыворотки добавляют 0,1 мл комплемента и 0,1 мл изотонического раствора хлорида натрия; 2) контроль вируса — к 0,1 мл вируссодержащей жидкости добавляют 0,1 мл комплемента и 0,1 мл изотонического раствора хлорида натрия.

Содержимое пробирок перемешивают и выдерживают 18 ч при температуре 4 °С. Затем в них вносят по 0,2 мл гемолитической системы, которая состоит из равных объемов (по 0,1 мл) гемолитической сыворотки, взятой в трехкратном титре и 3 % взвеси эритроцитов барана, перемешивают содержимое и помещают в термостат при 37°С до наступления полного гемолиза в контролях сыворотки, антигена и комплемента. Реакцию оценивают по четырехплюсовой шкале. Полный гемолиз обозначают знаком (—). Задержка гемолиза, оцененная 3—4+ в присутствии одной из эталонных иммунных сывороток, свидетельствует о соответствии исследуемого вируса типу этой сыворотки.