Особенности приготовления комплемента

Для приготовления разведения комплемента 1:20 берут 0,75 мл комплемента и добавляют 14.25 мл рабочего разведения буфера. Для ускорения работы буфер вместо отсутствующей в опыте сыворотки добавляется вместе с рабочим разведением комплемента. Это учтено при составлении схемы. Поэтому в ходе титрования комплемента в каждую лунку панели добавляют по 2 капли его разведеьий. указанных в строке 3. Таким образом, истинное разведение комплемента, используемое в опыте, будет в 2 раза выше и соответствует величинам, указанным в строке 4.

Ингредиенты перемешивают легким встряхиванием, после чего панели помещают в водяную баню (40 °С) на 5 мин и определяют титр (дозу) комплемента в присутствии каждого антигена. Титром является предельное разведение комплемента, которое вызывает полный гемолиз бараньих эритроцитов. Антигены с высокой антикомплементарностью бракуют. Рабочее разведение комплемента соответствует 2 ед. (дозам) и рассчитывается отдельно для каждого антигена. Расчет количества цельного комплемента, которое необходимо в реакции для каждого антигена, а также количество буфера для разведения комплемента производят по некоторым формулам.