Постановка главного опыта

В реакции используют 6 двукратных разведений сывороток, начиная с 1 : 10 до I :320. Для приготовления этих разведений сыворотки в 5 лунок вспомогательного ряда на отдельной панели наливают по 0,2 мл рабочего разведения буфера. В первую лунку вносят 6,2 мл предварительно разведенной 1 : 10 сыворотки, получая при этом разведение 1 :20. После перемешивания 0,2 мл сыворотки из первой лунки переносят во вторую (1:40), из второй — в третью (1:80) и т. д. до разведения 1 : 320. Из лунок с полученными разведениями сывороток, начиная с конечного, переносят по 1 капле Из каждого разведения в основную панель (на которой ставят главный опыт) в такое количество рядов, сколько антигенов взято в опыт. После раскапывания каждой сыворотки шприц трехкратно промывают рабочим раствором буфера.

Добавление антигена и комплемента. Рассчитанный для всего опыта объем каждого антигена смешивают с равным объемом рабочего разведения комплемента и стакан со смесью антигена с комплементом помещают в лед. При помощи шприца объемом 10—20 мл добавляют по 2 капли полученной смеси в каждый ряд с разведениями сывороток. Содержимое лунок перемешивают легким покачиванием и панели •выдерживают при 4°С 18 ч. На следующий день готовят гемолитическую систему и добавляют ее по 2 капли во все лунки панелей. Панели прогревают в водяной бане при 40 °С. Прежде всего в баню помещают панель, в которую внесены только антиген и комплемент (контроль антигена). По этой панели определяют время, через которое нужно учитывать реакцию. Полный гемолиз обычно наблюдается через 3—5 мин после погружения панели в баню.