Приготовление иммунопластин

Для приготовления иммунопластины (предметное стекло для микроскопа или пластиковая пластина того же размера) в пробирку с 2,6 мл расплавленной при 100 °С и охлажденной в водяной бане до 42 °С агарозы вносят 0,3 мл 50 % взвеси сенсибилизированных эритроцитов и 0,1 мл комплемента. Пробирку встряхивают до равномерного распределения эритроцитов в агарозе, после чего содержимое (3 мл) наносят равномерным слоем на иммунопластину. Для того чтобы агароза затвердела, пластины оставляют на 30 мин, а затем в ней вырезают лунки диаметром 3 мм. Приготовленные пластины могут храниться 2 сут при 4°С.

Постановка опыта. Исследуемые сыворотки (нативные или разведенные 1 : 10) прогревают при 56°С 30 мин и капельницей от микротитратора или иголкой, надетой на шприц, вносят в лунки иммунопластин в объеме 0,025 мл. Пластины инкубируют в термостате 16 ч при 37 °С в условиях повышенной влажности. Учет результатов. После инкубации пластин в термостате диаметр зон гемолиза эритроцитов вокруг лунок измеряют линейкой, калиброванной в мм. Диагностически достоверным считается увеличение диаметра зоны гемолиза в лунке со второй сывороткой по сравнению с первой не менее чем на 10%. Контроль. Опыт ставят с иммунопластинами, содержащими сенсибилизированные вирусом эритроциты без комплемента, а также пластинами с комплементом и эритроцитами, сенсибилизированными аллантоисной жидкостью интактных эмбрионов.