Приготовление рабочей дозы

В РТГА используют 4 АЕ вирусного антигена в объеме 0,1 мл. Так, при титре антигена 1 : 32 рабочая доза (4 АЕ) будет соответствовать разведению 1 : 8. Для приготовления рабочей дозы установленную величину титра антигена делят на 4. Полученная цифра показывает, во сколько раз нужно развести антиген, чтобы в 0,1 мл содержалось 4 АЕ вируса. Например, титр антигена равен 1 : 32, 32 : 4 = 8. Следовательно, для приготовления вирус-содержащей жидкости, концентрированной в 4 раза (4 АЕ) по сравнению с титром вируса (1 АЕ), антиген нужно развести в 8 раз (1 мл антигена и 7 мл изотонического раствора хлорида натрия). Перед постановкой основного опыта проверяют точность приготовленной в необходимом объеме рабочей дозы (4 АЕ).

Для этого в панелях используют 2 ряда по 5 лунок в каждом. В 4 лунки верхнего ояда, начиная со 2-й, и во все 5 лунок нижнего ряда наливают по 0,1 мл изотонического раствора хлорида натрия. В 2 первые лунки верхнего ряда наливают 0,1 мл из приготовленного в колбе необходимого для опыта рабочего разведения антигена. Таким образом, в 1-й лунке первого ряда находится только антиген в предполагаемой дозе 4 АЕ. Во 2-й лунке — 0,1 мл антигена и 0,1 мл изотонического раствора хлорида натрия. После перемешивания 0,1 мл смеси переносят в 3-ю лунку, отсюда в 4-ю и т. д. Во 2-й лунке получается двукратное разведение исходного раствора, т е. предположительно 2 АЕ, в 3-й лунке — 1 АЕ, в 4-й — 0,5 АЕ и в 5-й— 0,25 АЕ.