Титрование

Титрование комплемента выполняют на полистироловых панелях. Для работы подготавливают 3 % суспензию эритроцитов барана на изотоническом растворе хлорида натрия и гемолитическую сыворотку трехкратного титра. Для получения гемолитической системы к 3 % взвеси эритроцитов добавляют равный объем гемолитической сыворотки и смесь тщательно перемешивают быстрым переливанием. Для сенсибилизации готовая взвесь до употребления должна быть выдержана не менее 10 мин при комнатной температуре. Для титрования комплемента готовят его разведение 1 : 20 (0,5 мл цельного комплемента и 9,5 мл изотонического раствора хлорида натрия).

Из полученного раствора делают серию разведений комплемента. Титрование выполняют на полистироловой панели. Для этого в 8 лунок панели переносят по 0,1 мл приготовленных разведений комплемента, начиная с 1 пробирки. Во все лунки добавляют по 0,2 мл изотонического раствора хлорида натрия и по 0,2 мл сенсибилизированной гемолитической системы.. Панель встряхивают и помещают на 30 мин в термостат при 37 °С. За титр-комплемента принимают го его высшее разведение, которое вызывает полный гемолиз бараньих эритроцитов. Конечная концентрация комплемента в опыте должна в 2,5 раза превышать его титр.